无码无套少妇毛多69xxx,国产午夜福利100集发布,亚洲国产精品久久久久久久,人人澡超碰碰97碰碰碰

歡迎進(jìn)入上海聯(lián)祖生物科技有限公司網(wǎng)站!
13482402338
技術(shù)文章

TECHNICAL ARTICLES

當(dāng)前位置:首頁(yè)  -  技術(shù)文章  -  帕臘南病毒PCR檢測(cè)試劑盒反應(yīng)流程常規(guī)程序

帕臘南病毒PCR檢測(cè)試劑盒反應(yīng)流程常規(guī)程序

更新時(shí)間:2021-03-31點(diǎn)擊次數(shù):1303

帕臘南病毒PCR檢測(cè)試劑盒反應(yīng)流程常規(guī)程序:

將PCR反應(yīng)所需的成分配置完后,在PCR儀上于94-96℃預(yù)加熱幾十秒至幾分鐘,使模板DNA充分變性,然后進(jìn)入擴(kuò)增循環(huán)。在每一個(gè)循環(huán)中,先于94℃保持30秒鐘使模板變性,然后將溫度降到復(fù)性溫度(一般50-60℃之間),一般保持30秒鐘,使引物與模板充分退火;在72℃保持1分鐘(擴(kuò)增1kb片段),使引物在模板上延伸,合成DNA,完成一個(gè)循環(huán)。重復(fù)這樣的循環(huán)25~35次,使擴(kuò)增的DNA段大量累積。在72℃保持3-7min,使產(chǎn)物延伸完整,4℃保存。

2.復(fù)性(退火)和延伸溫度

復(fù)性的溫度是PCR擴(kuò)增是否順利的關(guān)鍵因素,通常在50-60℃之間。具體的溫度主要由引物的Tm值決定。延伸溫度絕大多數(shù)設(shè)定為72℃。如果復(fù)性的溫度很高,可以將延伸溫度和復(fù)性溫度設(shè)置成同一溫度,變成二步法PCR。

3.反應(yīng)時(shí)間

變性步驟一般使用30秒鐘,如果模板的G+C含量較高,或直接用細(xì)胞做模板,變性時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng)。復(fù)性時(shí)間有30秒種一般是足夠的。延伸時(shí)間由擴(kuò)增產(chǎn)物的大小決定,一般采用1kb用1分鐘來(lái)保證充足的時(shí)間。

4.循環(huán)次數(shù)

循環(huán)次數(shù)主要與模板的起始數(shù)量有關(guān),在模板拷貝數(shù)為104~105數(shù)量級(jí)時(shí),循環(huán)數(shù)通常為25~35次。

平臺(tái)效應(yīng)(plateaueffect):PCR擴(kuò)增過(guò)程后期會(huì)出現(xiàn)的產(chǎn)物的積累按減弱的指數(shù)速率增長(zhǎng)的現(xiàn)象。原因:底物和引物的濃度已經(jīng)降低,dNTP和DNA聚合酶的穩(wěn)定性或活性降低,產(chǎn)生的焦磷酸會(huì)出現(xiàn)末端產(chǎn)物抑制作用,非特異性產(chǎn)物或引物的二聚體出現(xiàn)非特異性競(jìng)爭(zhēng)作用,擴(kuò)增產(chǎn)物自身復(fù)性,高濃度擴(kuò)增產(chǎn)物變性不*。

5.PCR反應(yīng)液的配制

PCR反應(yīng)體系的配置方式有時(shí)也會(huì)影響反應(yīng)的正常進(jìn)行。常規(guī)方法與其它酶學(xué)反應(yīng)一樣,在加入DNA聚合酶。早期的PCR儀沒(méi)有帶加熱的蓋子,要求在反應(yīng)液上覆蓋一層礦物油,防止水分蒸發(fā)。

對(duì)于使用具3’-5’外切活性的高溫DNA聚合酶時(shí),有時(shí)會(huì)擴(kuò)增不出產(chǎn)物。在遇到這個(gè)問(wèn)題時(shí),如果將反應(yīng)成分分開(kāi)配制,A管含模板、引物和dNTP,以及調(diào)整體積的H2O,B管含緩沖液、DNA聚合酶和水,然后再將兩管溶液混合起來(lái),可較好地克服這個(gè)問(wèn)題。

按照常規(guī)的方法配制反應(yīng)體系,有時(shí)會(huì)出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增的問(wèn)題。熱啟動(dòng)(hotstart)PCR操作方式可較好解決這一問(wèn)題。將dNTP、緩沖液,Mg2+和primer先配制好,然后加入一粒蠟珠(如AmpliWaxPCRQam100),加熱熔化,再冷卻,使蠟將溶液封住,加入模板和DNA聚合酶等剩余成分。只有當(dāng)PCR反應(yīng)進(jìn)入高溫階段后,蠟層熔化,所有反應(yīng)成分才會(huì)混合在一起。

TEL:021-61210612

掃碼加微信

高清vpswindows另类乱| 欧亚精品卡一卡二卡三| 丰满学生被猛烈进入播放| 国产精品免费无遮挡无码永久视频| 成人免费看吃奶视频网站| 2023国精产品一二二线精华液| 狠狠色综合7777久夜色撩人,| 中文字幕无码亚洲字幕成a人蜜桃 强开美妇后菊哀嚎哭叫视频 | 国产老头老太作爱视频| 午夜精品国产精品大乳美女| 男与女 电影| 去男朋友宿舍被室友4p| 无码人妻丰满熟妇区免费| 久久99国产精品久久99果冻传媒| 荫蒂添的好舒服视频| 亚洲精品粉嫩小泬18p| 香港三日本三级少妇三级视频| 欧美精品在线观看| 制服丝袜中文字幕在线| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 免费a片看黄网站www下载| 韩国三级日本三级人与波| 蜜臀AV性久久久久蜜臀AⅤ麻豆 | 局长含着秘书的小奶头| 8AV国产精品爽爽ⅤA在线观看 | 隔壁邻居是巨爆乳寡妇| 中国china露脸自拍性hd| 人妻用嘴含精大口吞精| 日本无翼乌邪恶彩色大全| 香蕉久久人人爽人人爽人人片av| 欧美精品乱码99久久蜜桃| 邻居少妇太爽了a片无码| 任你躁国语自产在线播放| 亚洲性色AV私人影院无码| 国产精品永久久久久久久久久| 久久亚洲AV成人无码电影A片| 色欲久久久天天天综合网| a片在线免费观看| WWW.一本色道88久久爱| 成人片色情免费观看网站| 亚洲av一宅男色影视|